У нас юбилей!
Выделение вируса гриппа с помощью настольной ультрацентрифуги himac CS150NX производства Koki Holdings (Япония)
Вирус гриппа относится к семейству ортомиксовирусов и содержит одноцепочечные молекулы РНК. Существует 3 вида вирусов гриппа в зависимости от серотипа - А, В и С. Вирус гриппа имеет сферическую форму и диаметр 80-120 нм. Выделение и исследование разных вирусов гриппа имеет огромное прикладное значение в связи с пандемиями последних лет.
В данном эксперименте проводилось выделение вирусов гриппа с помощью углового ротора S50A на настольной ультрацентрифуге himac CS150NX, которая имеет наилучшие характеристики скорости и ускорения в своем классе.
Оборудование
Центрифуга: настольная ультрацентрифуга himac CS150NX
Ротор: угловой ротор S50A (может откручивать 6 пробирок одновременно)
Пробирки: пробирки поликарбонатные толстостенные на 25 мл
Описание эксперимента
Центрифугируйте инфицированную аллантоисную жидкость или инфицированную клеточную культуру при скорости 6 000 об/мин в течение 20 минут для отделения грубой фракции (дебриса)
↓Перенесите супернатант в толстостенные поликарбонатные пробирки на 25 мл (по 19 мл в каждую пробирку)
↓Центрифугируйте на угловом роторе S50A при скорости 32 000 об/мин, в течение 45 минут при +4°С, режимы ускорения/торможения – 9/7
↓Удалите супернатант и добавьте 1,5 мл вероналового буфера, содержащего 3 мМ CaCl2, до образования осадка. (Для предотвращения образования вирусного скопления добавьте небольшое количество буфера к осадку, перемешайте и оставьте на ночь при +4°С)
↓Концентрированную вируссодержащую жидкость наслоите на градиентный раствор сахарозы (по 17 мл 10-40%), предварительно приготовленный в толстостенных поликарбонатных пробирках на 25 мл
↓Центрифугируйте на угловом роторе S50A при 32 000 об/мин в течение 45 минут при +4°С, режимы ускорения/торможения – 9/7
↓В верхней части пробирки формируется белый вирусный слой, который легко можно увидеть, рассматривая пробирку против света. Соберите вирусный слой (примерно 2 мл)
↓Разбавьте фракцию вируса буфером примерно в 1,5 раза (доведите до объема 3 мл). Полученный раствор наслоите на градиентный раствор сахарозы (по 15 мл 30-60%) в толстостенной поликарбонатной пробирке на 25 мл
↓Центрифугируйте на угловом роторе S50A при 32 000 об/мин в течение 3 часов при +4°С, режимы ускорения/торможения – 5/7
↓Соберите образовавшийся вирусный слой и разбавьте его буфером в 2,5 раза или более
↓Центрифугируйте на угловом роторе S50A при 32 000 об/мин в течение 1 часа при +4°С, режимы ускорения/торможения – 9/7
↓Добавьте буфер к осадку и суспендируйте.