У нас юбилей!
Выделение геномной ДНК из растительной ткани с использованием настольных высокоскоростных микроцентрифуг himac CT15E/CT15RE производства Eppendorf AG
В этом эксперименте рассматривается получение геномной ДНК из растительной ткани с использованием набора DNeasy Plant Kit (QIAGEN) на микроцентрифугах himac CT15E или CT15RE при использовании угловых роторов T15A61/T15A62. Выделение геномной ДНК с помощью центрифугирования имеет ряд преимуществ перед другими методами.
Оборудование
Центрифуга: настольная высокоскоростная микроцентрифуга CT15E или CT15RE
Ротор: угловой ротор T15A61 (2мл/1.5мл х 24 пробирки) или угловой ротор T15A62 (2мл/1.5 x 24 пробирки или 0.5 мл пробирки x 24)
Набор для выделения: DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN)
Описание эксперимента
- С помощью жидкого азота измельчите растительную ткань в мелкий порошок пестиком в ступке
- Поместите порошок в 2 мл микропробирку
- Добавьте 400 мкл буфера AP1 и 4 мкл RNease A в концентрации 100 мг/мл в пробирку и энергично встряхните
- Инкубация при температуре +65 °С в течение 10 минут. Перемешайте 2-3 раза во время инкубации
- Добавьте 130 мкл буфера AP2 в пробирку и перемешайте
- Выдержите на льду в течение 5 минут
- Центрифугируйте на микроцентрифугах himac CT15E или CT15RE при 14 500 об/мин (20 000 х g) в течение 5 минут при комнатной температуре
- Поместите QIAshredder Mini spin колонки в новые 2 мл микропробирки. Вылейте супернатант в QIAshredder Mini spin колонки. Отрежьте крышку микропробирки, содержащей колонки
- Центрифугируйте на микроцентрифугах himac CT15E или CT15RE при 14 500 об/мин (20 000×g) в течение 2 минут при комнатной температуре
- Налейте фракцию фильтрата, пропуская через колонку, в новые 2 мл микропробирки
- Добавьте 1,5 объема (или больше) буфера AP3/E в пробирку и осторожно перемешайте пипеткой
- Поместите DNeasy Mini spin колонку в новую 2 мл микропробирку. Налейте 650 мкл полученного раствора в DNeasy Mini spin колонку. Отрежьте крышку микропробирки, содержащей колонки
- Центрифугируйте на микроцентрифугах himac CT15E или CT15RE при 8 000 об/мин (6 000 х g) в течение 1минуты при комнатной температуре
- Удалите фильтрат
- Добавьте 500 мкл буфера AW в DNeasy Mini spin колонку
- Центрифугируйте на микроцентрифугах himac CT15E или CT15RE при 8 000 об/мин (6 000 х g) в течение 1 минуты при комнатной температуре
- Удалите фильтрат
- Добавьте 500 мкл буфера AW в DNeasy Mini spin колонку
- Центрифугируйте на микроцентрифугах himac CT15E или CT15RE при 14 500 об/мин (20 000 х g) в течение 2 минут при комнатной температуре и осушите фильтр
- Поместите DNeasy Mini spin колонку после описанной выше процедуры в новую 1,5 мл микропробирку и добавьте буфер AE в колонку
- Выдержите при комнатной температуре в течение 5 минут
- Центрифугируйте на микроцентрифугах himac CT15E или CT15RE при 8 000 об/мин (6 000 х g) в течение 1 минуты при комнатной температуре
- Извлеките DNeasy Mini spin колонку из пробирки. Элюат раствора геномной ДНК в пробирке следует хранить при -70°С.
Примечания:
Обязательно прочитайте инструкцию по эксплуатации ротора перед использованием.
Прочитайте инструкцию по эксплуатации набора QIAGEN для детализации протокола.
Не устанавливать скорость ротора более 10 000 об/мин (12 000 х g) при использовании 1,5 мл микропробирок с открытой крышкой при +4 °С. Крышка может оторваться под действием центробежной силы.