У нас юбилей!
Выделение РНК из растительной ткани с использованием настольных высокоскоростных микроцентрифуг himac CT15E/CT15RE производства Eppendorf AG
В этом эксперименте рассматривается получение высококачественной РНК из растительной ткани с использованием набора RNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) на микроцентрифугах himac CT15E или CT15RE при использовании угловых роторов T15A61/T15A62. Метод выделения РНК со стадией центрифугирования – простой и эффективный метод получения чистых образцов.
Оборудование
Центрифуга: настольная высокоскоростная микроцентрифуга CT15E или CT15RE
Ротор: угловой ротор T15A61 (2мл/1.5мл х 24 пробирки) или угловой ротор T15A62 (2мл/1.5 x 24 пробирки или 0.5 мл пробирки x 24)
Набор для выделения: RNeasy Mini Kit (QIAGEN)
Описание эксперимента
С помощью жидкого азота измельчите растительную ткань в мелкий порошок пестиком в ступке
↓
Поместите порошок в 2 мл микропробирку
↓
Добавьте 450 мкл буфера RLT в пробирку и встряхните
↓
Инкубируйте при температуре +56 °С в течение 1-3 минут
↓
Вставьте QIAshredder spin колонки в новые 2 мл микропробирки, предварительно отрезав крышки. Осторожно перенесите полученный клеточный лизат в QIAshredder спин колонки.
↓
Центрифугируйте при 15 000 об/мин (21 500 х g) в течение 2 минут при комнатной температуре
↓
Переместите фильтрат в новые 2 мл микропробирки
↓
Добавьте 0,5 объема (или больше) 96%-ного этанола в пробирку и перемешайте осторожно пипеткой
↓
Вставьте RNeasy spin колонку в новую 2 мл микропробирку, предварительно отрезав ее крышку. Поместите 650 мкл полученного раствора в RNeasy спин колонку.
↓
Центрифугируйте при 9 200 об/мин (8 000 х g) в течение 15 секунд при комнатной температуре
↓
Удалите фильтрат
↓
Добавьте 700 мкл буфера RW1 в RNeasy spin колонку
↓
Центрифугируйте при 9 200 об/мин (8 000 х g) в течение 15 секунд при комнатной температуре
↓
Удалите фильтрат
↓
Добавьте 500 мкл буфера RPE в RNeasy spin колонку
↓
Центрифугируйте при 9 200 об/мин (8 000 х g) в течение 15 секунд при комнатной температуре
↓
Удалите фильтрат
↓
Добавьте 500 мкл буфера RPE в RNeasy spin колонку
↓
Центрифугируйте при 9 200 об/мин (8 000 х g) в течение 2 минут при комнатной температуре
↓
Поместите RNeasy spin колонку, использованную в описанной выше процедуре, в новую 1,5 мл микропробирку, предварительно отрезав ее крышку.
↓
Добавьте 30-50 мкл дистиллированной воды в RNeasy spin колонку
↓
Центрифугируйте при 9 200 об/мин (8 000 х g) в течение 1 минуты при комнатной температуре
↓
Извлеките RNeasy spin колонку из пробирки. Элюат раствора РНК в пробирке следует хранить при -70 °С.
Примечание:
- Обязательно прочитайте инструкцию по эксплуатации ротора перед использованием.
- Прочитайте инструкцию по эксплуатации набора QIAGEN для детализации протокола.
- Не устанавливайте скорость ротора более 10 000 об/мин (12 000 х g) при использовании 1,5 мл микропробирок с открытой крышкой при +4 °С. Крышка может оторваться под действием центробежной силы.