У нас юбилей!
Выделение геномной ДНК из рисовых листьев с использованием высокоскоростных микроцентрифуг himac CF15RN/CF16RN производства Eppendorf AG
В этом эксперименте рассматривается получение геномной ДНК из рисовых листьев с использованием напольных высокоскоростных центрифуг himac CF15RN/CF16RN и угловых роторов T15A45/T15A46. Выделение геномной ДНК с помощью высокоскоростных микроцентрифуг – простой, быстрый и экономичный метод получения чистых образцов.
Оборудование
Центрифуга: напольная высокоскоростная микроцентрифуга himac CF15RN или CF16RN
Ротор: угловой ротор T15A45 (пробирки 5 мл х 12) или T15A46 (пробирки Eppendorf 5 мл х 12)
Описание эксперимента
- Измельчите 0,3 г рисового листа и поместите полученный образец в 5 мл пробирку
- В каждую пробирку добавьте по 0,8 мл 1,5 х цетилтриметиламмоний бромидного экстрактного буфера
- Инкубируйте при комнатной температуре в течение 10 минут
- Добавьте 0,8 мл хлороформа и перемешайте
- Инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 минут
- Центрифугируйте при 10 000 х g и температуре +20 °С в течение 10 минут
- Перенесите верхнюю фракцию в новую 5 мл пробирку
- Добавьте 0,8 мл буфера для осаждения и перемешайте с помощью пипетки
- Инкубируйте при температуре +55 °С в течение 30 минут
- Центрифугируйте при 10 000 х g и температуре +20 °С в течение 10 минут
- Удалите супернатант
- Добавьте 0,8 мл одномолярного раствора NaCl-TE и ресуспендируйте
- Инкубация образца при температуре +55 °С в течение 2-х часов
- Центрифугируйте при 10 000 х g и температуре +20 °С в течение 10 минут
- Переместите супернатант (около 0,8 мл) в новую 5 мл пробирку
- Добавьте 0,8 мл изопропилового спирта и хорошо перемешайте
- Центрифугируйте при 10 000 х g и температуре +20 °С в течение 10 минут
- Удалите супернатант
- Добавьте 1,5 мл 70%-ного этанола
- Центрифугируйте при 10 000 х g и температуре +20 °С в течение 5 минут
- Удалите супернатант
- Центрифугируйте при 10 000 х g и температуре +20 °С в течение 2 минут
- Удалите весь супернатант с помощью автоматической пипетки и высушите
- Добавьте 100 мкл TE буфера и полностью растворите осадок с помощью вортекса
- Перенесите полученный образец ДНК в 1,5 мл пробирку и храните при -20°С.