У нас юбилей!
Набор Ampli1 WGA для полногеномной амплификации ДНК одиночных клеток производства Menarini-Silicon Biosystems (Италия)
Запатентованный набор Ampli1™ KIT специально разработан и оптимизирован для амплификации тотальной ДНК, содержащейся в одной клетке. Конечный продукт представляет собой библиотеку фрагментов ДНК длиной 0,2-2 Кб. ДНК, полученная при помощи набора Ampli1™ WGA, идеально подходит для последующего генетического анализа, в том числе для полногеномного секвенирования.
Протокол Ampli1™ WGA
Надежность: опосредованная лигированием ПЦР обеспечивает равномерную амплификацию
Воспроизводимость: все процедуры в одной пробирке
Стабильность: выход ДНК из одной клетки - до 5 мкг, длина фрагментов 0.2-2 Кб
Получение результата в течение рабочего дня
|
|
|
|
|
|
|
Добавить лизирующую смесь, инкубировать при +42°C |
|
Добавить рестрикционную смесь, инкубировать при +35°C |
|
Добавить лигационную смесь, инкубировать при +15°C |
|
Добавить ПЦР-смесь, амплификация |
Особенности набора Ampli1™ WGA
- Полученная с помощью набора Ampli1™ WGA ДНК не требует дополнительной очистки и разбавления для последующего анализа.
- В наборе Ampli1™ WGA используется улучшенная полимераза с меньшей частотой ошибок (4.8х10-6) по отношению к стандартной Taq-полимеразе.
- По необходимости, 1 мкл продукта Ampli1™ WGA можно реамплифицировать, чтобы получить 50 мкл ДНК для дальнейшего анализа.
- Новая возможность Ampli1™: полнотранскриптомная амплификация РНК одиночных клеток.
Варианты последующего анализа
ДНК, полученная при помощи набора Ampli1™ WGA из одиночных клеток, может использоваться в различных исследованиях:
- SNP-генотипирование
- Анализ STR
- Анализ CNV
- Секвенирование следующего поколения
- Полногеномное секвенирование
- Сравнительная геномная гибридизация
Набор Ampli1™ WGA легко адаптируется для протоколов вышеуказанных методов исследований.
Высокое качество амплификации для всех типов образцов
Набор Ampli1™ WGA предназначен для работы с образцами, содержащими как одну клетку, так и множество клеток (больше 1 000).
- Живые клетки (крови, тканей, спермы)
- FFPE-образцы
- Фиксированные клетки (1-2% параформальдегид)
- Одиночные клетки, подготовленные при помощи системы Veridex CellSearch®
- Окрашенные клетки, например, антитела, конъюгированные с флуоресцентной меткой Хехст 33342
Надежная амплификация для живых и фиксированных клеток
STR анализ по 11 локусам показал, что набор Ampli1™ WGA хорошо работает как на живых, так и фиксированных клетках.
Амплификация и секвенирование ДНК одной клетки при помощи набора Ampli1™ WGA
При помощи систем CellSearch™ и DEPArray™ из крови больного колоректальным раком выделены циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) и лейкоциты. Иммуногистохимическое окрашивание с использованием цитокератина позволило визуализировать ЦОК и лейкоциты отдельно. Геномная ДНК из одиночных ЦОК и лейкоцитов была амплифицирована при помощи набора Ampli1™ WGA, а затем секвенирована на онкопанели Ion Ampliseq™. Обнаружены две новые мутации в генах FBXW7 и TP53 в ЦОК по сравнению с лейкоцитами.
ЦОК
Лейкоцит