У нас юбилей!
21.03.2022
ЗАНИМАЕТЕСЬ ИССЛЕДОВАНИЕМ БЕЛКА?
Расширьте возможности получения данных для своего исследования с помощью флуоресцентного вестерн-блоттинга. После зондирования сделайте снимок и проанализируйте его с помощью цифрового имидж-сканера Azure 600. Он имеет возможности визуализации как в ближнем ИК-диапазоне, так и в видимой флуоресценции.
3 способа использования флуоресцентных пятен:
1. Количественная оценка ваших данных
Сигнал от флуоресцентного первичного или вторичного антитела прямо пропорционален целевому количеству.
Быстрое и простое мечение антител
Наборы для маркировки AzureSpectra содержат все материалы, необходимые для быстрой маркировки первичных и вторичных антител флуоресцентными красителями. Пометьте первичные или вторичные антитела для проведения прямых или традиционных вестерн-блотов. Меченые антитела совместимы с несколькими иммунофлуоресцентными платформами, включая проточную цитометрию, иммунофлуоресцентную микроскопию и вестерн-блоттинг.
2. Обнаружение нескольких белков
Мультиплексные вестерн-блоты позволяют визуализировать и количественно определять белки на одной и той же дорожке.
Трехцветные вестерн-блоты с Антителами AzureSpectra
Визуализируйте три белка одновременно с помощью антител, меченных AzureSpectra.
Классические методики вестерн-блоттинга с использованием хемилюминесцентного обнаружения обычно используются для обнаружения одного белка за 1 раз. Для оценки несколько представляющих интерес белков с использованием хемилюминесценции обычно требуется удаление и повторное зондирование блота или разделение образцов на отдельные анализы.
Визуализация нескольких представляющих интерес белков в одном и том же образце одновременно – или мультиплексирование – возможна с помощью флуоресцентных антител. Антитела, несущие различные флуорофоры (с неперекрывающимися спектрами), могут быть обнаружены одновременно с помощью правильной системы визуализации. С помощью цифрового имидж-сканера, такого как Azure c600, вы можете визуализировать три белка одновременно.
Зачем вам нужно визуализировать несколько белков одновременно? Удобство является очевидным преимуществом мультиплексирования, поскольку контроль загрузки часто используются для данных Western blot. Используя различные вторичные антитела с флуоресцентной меткой для интересующего белка наряду с контролем загрузки, четкие и поддающиеся количественной оценке результаты готовы к немедленному анализу, даже если белки близки по молекулярной массе. Кроме того, количественная оценка более желательна при публикации данных об экспрессии белка. Что если у вас есть два разных интересующих белка, таких как фосфорилированная и нефосфорилированная версия белка? Чтобы включить контроль загрузки, для точного сравнение разных дорожек , третий цвет будет необходим. И это очень удобно, что трехцветный вестерн-блоттинг возможен и прост с мечеными AzureSpectra антителами и системой Azure c600. Система визуализации Azure c600 специально предназначена для многоцветного флуоресцентного вестерн-блоттинга с двумя ближними инфракрасными (NIR) и 3 видимыми флуоресцентными каналами.
3. Получение хорошего разрешения для полос, мигрирующих близко друг от друга
Анализ посттрансляционных модификаций методом флуоресценции. Здесь показаны α-STAT1 (красный) и α-фосфо-STAT1 (зеленый), визуализированные одновременно и количественно оцененные отдельно друг от друга с помощью Azure Imager
Обнаружение фосфорилированного белка более эффективно с помощью флуоресцентного вестерн-блоттинга.
Обнаружение фосфорилированных белков обычно требует выявления как нефосфорилированных, так и фосфорилированных видов. Для традиционных хемилюминесцентных методов незначительная разница в размерах между фосфорилированным и нефосфорилированным интересующим белком требует зондирования фосфоспецифичным антителом, затем удаления, а затем повторного зондирования специфическим для белка антителом. Наряду с потенциальными негативными последствиями для качества данных, процесс удаления и повторного зондирования может занять значительное количество времени и реагентов.
Недостатки традиционного хемилюминесцентного метода обнаружения могут быть преодолены с помощью флуоресцентных вторичных антител. Флуоресцентные вторичные антитела, несущие два разных флуорофора (с неперекрывающимися спектрами), допускают мультиплексирование; это означает, что одновременно могут быть обнаружены как фосфорилированные, так и нефосфорилированные виды. Возможность мультиплексирования не только делает ИК-детекцию более быстрым способом визуализации фосфорилированных и нефосфорилированных версий интересующего белка, но и делает количественную оценку более точной. Удаление блота не всегда является равномерным или полностью эффективным; более того, процесс удаления иногда может удалить часть исходного белка. Количественная оценка белков до и после удаления менее точна, чем если бы удаление вообще не проводилось. Таким образом, протокол, который визуализирует модифицированные и немодифицированные белки одновременно, обеспечивает повышенную точность, а также удобство скорости.