Клеточный сортер JSAN производства Bay bioscience (Япония)
JSAN (Japan-made sorter, analyzer) – настольный клеточный сортировщик с функциями анализатора. Высокотехнологический клеточный сортер последнего поколения, отличающийся высокой производительностью, надежностью, качеством сортировки и анализа клеток, а также удобным и интуитивно понятным интерфейсом. Уровень сложности управления клеточным сортером, несмотря на то, что прибор также обеспечивает отбор клеток с высокой точностью и высокой выживаемостью, сопоставим с работой на обычных проточных цитофлуориметрах.
Благодаря простоте в обращении, высокой производительности и быстрой обработке данных этот надежный клеточный сортер станет идеальным выбором для лабораторий, которым необходимо решать как сложные аналитические задачи, так и задачи точной сортировки клеток. Идя в ногу со временем и с последними разработками в области цитофлуориметрии, пользователи клеточных сортировщиков JSAN сегодня могут выбирать из широкого набора лазеров с длинами излучения от ультрафиолета до инфракрасной области спектра. Также доступна опция CloneMate – устройство позволяющее производить сортировку одиночных (или любого заданного числа) клеток в отдельные лунки планшетов.
Оптическая детекционная система – высокая точность, простая оптическая схема
- Лазерный пучок направляется непосредственно на клетку в потоке, без использования оптоволокна. Таким образом, сокращаются потери интенсивности и достигается максимальная мощность возбуждения.
- Регистрирующие оптоволокна, соответствующее каждому лазеру, расположены максимально близко к исследуемой клетке.
- Оптоволокно направляет флуоресцентные сигналы, соответствующие каждому лазеру, в соответствующий этому лазеру детектор, что устраняет возможные помехи – таким образом, лазерные пучки могут быть расположены очень близко.
- Лазеры фиксированы на оптическом столе и закреплены настолько надежно, что позволяют снимать и устанавливать обратно (для чистки) дозирующий клетки модуль практически без последующей юстировки прибора.
- Сопло, формирующее поток жидкости, обеспечивает высокоскоростной капельный сортинг.
- Модуль дозирования клеток может быть легко снят и установлен обратно за несколько секунд. Это позволяет производить чистку и удалять сгустки и засоры из сопла быстро, удобно, без вызова сервисной бригады. Чтобы сделать чистку еще более удобной и эффективной, клеточный сортер можно дополнить ультразвуковым очистителем.
- Простое и компактное оптическое решение обеспечивает эффективное возбуждение флуоресценции.
- Клеточный сортировщик в стандартной комплектации оснащается надежным стабильным твердотельным лазером с длиной волны 488 нм и полупроводниковым лазером с длиной волны 638 нм. Оба лазера работают от обычной электросети и не требуют специального охлаждения
- Клеточный сортер JSAN может быть оснащен четырьмя лазерами на стандартном оптическом столе одновременно, с единовременным использованием трех. (Дополнительные третий и четвертый лазеры устанавливаются коллинеарно)
- Стандартные опциональные полупроводниковые лазеры длиной волны 375 нм или 405 нм
- Опциональный 375 нм лазер позволяет анализировать и сортировать крашенные Hoechst SР клетки, а 405 нм лазер позволяет использовать такие флуорохромы, как Pacific Blue или Pacific Orange
- Также существует возможность установки 534 нм и 561 нм лазеры, ведется разработка лазеров с другими длинами волн. Излучение данных длин волн позволяет использовать недавно разработанные красители, такие как DsRed, CFP, или Kaede
- Оптические фильтры, используемые в сортировщике клеток JSAN, имеют стандартный размер (круглые, 25 мм в диаметре).
- Пользователи могут приобрести и использовать свои собственные фильтры.
- Детектируемой оптический сигнал конвертируется в цифровой 20-тибитный сигнал при помощи современного процессора и микросхем.
- Использование 20-тибитного сигнала устраняет расхождение (размывание из-за ошибок округления) данных прилегающих к осям графиков.
Упрощенные и быстрые настройки сортировки клеток и автоматический контроль каплеобразования делают клеточный сортировщик JSAN надежной и простой в использовании системой
- Для быстрой настройки прибора и более надежных результатов JSAN использует специальное патентованное программное обеспечение OptiDrop для мониторинга и автоматической настройки оптимального каплеобразования. Для предотвращения потери образца, OptiDrop автоматически фиксирует сбои в формировании капель и потока, подает звуковой сигнал и немедленно останавливает поток среды и процесс сортировки.
Автоматическая коррекция времени задержки капли способствует более стабильной и надежной сортировке
- OptiDelay (запатентовано) обеспечивает автоматический контроль задержки капли, что является ключевым моментом для качественного стабильного и аккуратного сортинга. Контроль осуществляется за счет непрерывного мониторинга параметров и расчетов оптимального времени.
- OptiDelay способен мгновенно зафиксировать и скорректировать возможные серьезные, но малоразличимые изменения, влияющие на формирование капли, обеспечивая стабильность процесса сортировки.
Простота переключения между несколькими режимами сортировки
- Доступны три режима сортировки: (a) Стандартный, (b) Высокий сбор и (c) Высокая чистота.
- Каждый режим сортировки имеет настройки параметров капель и их количества.
Скорость сортировки до 20 000 событий в секунду
- Совмещение технологии высокоскоростной цифровой электроники, дизайна регистрационной камеры, обеспечивающего наиболее чувствительную детекцию, и контролирующих алгоритмов OptiDrop и OptiDelay обеспечивают выдающееся качество сортировки.
- Используемые технологии позволяют производить сортировку в потоке под давлением всего в 2 атм., что меньше травмирует сортируемые клетки.
Экономящий пространство настольный клеточный сортер
- JSAN наиболее компактный высокопроизводительный клеточный сортировщик из предлагаемых на рынке. Этот прибор занимает места не больше, чем традиционный проточный цитофлуориметр, но помимо анализа позволяет производить и сортировку клеток.
- Клеточный сортер JSAN комфортабельно размещается на лабораторном столе метровой ширины, в то время как жидкостные модули и насос располагаются под столом.
- Все контроллеры доступны с передней панели.
Внешний вид и размеры (мм)
Дополнительные опции
CloneMate: автоматизированный модуль подачи и распределения клеток
- Оснащение JSAN модулем CloneMate позволяет с легкостью сортировать клетки в каждую лунку микропланшета.
- CloneMate дает возможность сортировки любого заданного количества клеток в заданные лунки.
Выбор цвета корпуса
- Цвета – синий, зеленый, красный и черный.
Аналитическое применение
Мультицветный анализ
Пример исследования лимфоцитов из нормальной периферической человеческой крови. Клетки были мечены одновременно несколькими иммуноглобулинами к антигенам, определяющим различные фенотипы. Далее популяция была исследована на JSAN с использованием статистического алгоритма AppScan. Клетки были поделены на субпопуляции с различными фенотипами по результатам восьмицветного анализа.
Используемые красители:
FL-1: FITC-CD8, FL-2: PE-CD56, FL-3: PE-Cy5-CD19, FL-4: PE-Cy7-CD28, FL-5: APC-CD3, FL-6: APC-eFluor780-CD62L, FL-7: eFluor605-CD4, FL8: eFluor450-CD45RA
Гены–репортеры
Гены, кодирующие флуоресцентные белки, широко используются в качестве генов-репортеров. Изначально единственным подобным геном был ген кодирующий GFP. Однако сегодня возможно использование таких генов как YFP (желтый) и RFP (или DsRed - красный). Таким образом, стало возможным одновременное использование сразу нескольких генов-репортеров в одном эксперименте.
Ниже представлено сравнение данных, полученных при возбуждении DsRed лазерами с длинами волны 488 нм или 561 нм. Показано, что возбуждение 561 нм лазером более эффективно.
Субпопуляции – клеточный сортинг
Примером субпопуляций клеток могут быть стволовые клетки с одним уровнем полипотентности. В данном примере клетки были окрашены красителем Hoechst 33342, обладающим афинностью к ДНК. Было показано, что активность мембранных насосов в стволовых клетках значительно выше, чем в остальных. Таким образом, краситель выводится из клетки, и ДНК окрашена менее ярко (это подтверждается экспериментами с применением блокаторов мембранных насосов Verapamil или Reserpine).
- Клетки спинного мозга мыши были окрашены Hoechst 33342, проанализированы и сортированы при помощи JSAN. (Рис. 1, 2)
- Клетки карциномы человека (MCF-7), окрашенные Hoechst 33342, проанализированы и отсортированы на JSAN. (Рис. 3)
Анализ клеточного цикла
Окрашивание клеточной ДНК также применяется для анализа клеточного цикла, распределение популяции по фазам цикла. Различные препараты, радиация, генные мутации и другие факторы оказываю важное влияние на клеточный цикл, что делает его анализ важной составляющей многих исследований. Проточная цитофлуориметрия является удобным, быстрым, надежным и точным методом получения распределения популяции клеток по фазам цикла.
Основные технические характеристики сортировщика клеток JSAN
Скорость анализа |
Более 60 000 событий в секунду |
Скорость сортировки |
До 20 000 клеток в секунду при давлении 30 psi |
Оптическая платформа |
Поддерживает одновременное использование до 3-х источников возбуждения (лазеров) + 1 коллинеарный лазер |
Количество линий возбуждения |
До 3 |
Лазеры возбуждения |
488 нм, 20 мВт (стандарт) 638 нм, 20 мВт, (опция, 2-й лазер) 405 нм, 50 мВт (опция, 3-й или 4-й лазер) 375 нм, 16 мВт (опция, 3-й или 4-й лазер) 561 нм, 50 мВт (опция, 3-й или 4-й лазер) Все лазеры твердотельные или полупроводниковые |
Чувствительность флуоресценции |
200 MESF |
Оптические параметры детекции |
2 параметра светорассеяния и до 8 параметров флуоресценции одновременно |
Компенсация флуоресценции |
Компенсационная матрица 6x6 или 8x8 в зависимости от конфигурации лазеров |
Разрешение сигнала |
20 бит |
Динамический диапазон данных |
4-6 декад |
Чистота сортировки |
>98 % |
Метод сортировки |
«Сортировка в воздухе» |
Режимы сортировки |
Высокая чистота, нормальный, скоростной отбор |
Сбор клеток |
Сортировка в 2 фракции в пробирки и планшеты |
